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PM原代細胞核酸轉(zhuǎn)染試劑盒

簡要描述:PM原代細胞核酸轉(zhuǎn)染試劑盒是專門用于核酸原代細胞高效轉(zhuǎn)染的試劑盒。它具有非常好的轉(zhuǎn)染性能,可高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細胞,轉(zhuǎn)染效率可高達 85%以上(EGFP 質(zhì)粒)。

  • 產(chǎn)品型號:abs60324
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2025-02-08
  • 訪  問  量:1335

詳細介紹

品牌absinCAS-
分子式-純度-
分子量-貨號abs60324
規(guī)格0.5ml;1.0ml;1.5ml供貨周期現(xiàn)貨
主要用途專門用于核酸原代細胞高效轉(zhuǎn)染的試劑盒應(yīng)用領(lǐng)域生物產(chǎn)業(yè)

產(chǎn)品介紹:

    PM原代細胞核酸轉(zhuǎn)染試劑盒是專門用于核酸原代細胞高效轉(zhuǎn)染的試劑盒。它具有非常的轉(zhuǎn)染性能,可高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細胞,轉(zhuǎn)染效率可高達 85%以上(EGFP 質(zhì)粒)。其功能強大,不僅可高效轉(zhuǎn)染較大分子的質(zhì)粒 DNA,還可高效轉(zhuǎn)染 mRNA、siRNA、mimics 和各種小分子 DNA。與目前市場上常見的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑不同,它采用生物可降解材料配制,對細胞的毒性很低,轉(zhuǎn)染后 24 小時細胞幾乎無明顯死亡。使用也非常方便,先將轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒 DNA 混合,再將轉(zhuǎn)染試劑-DNA 復(fù)合物直接加入培養(yǎng)細胞中,血清不影響其轉(zhuǎn)染效果,不必刻意添加或更換培養(yǎng)液,操作十分簡便。 


產(chǎn)品特點:

1、強大的細胞轉(zhuǎn)染性能:可高效轉(zhuǎn)染多種原代細胞,轉(zhuǎn)染效率在原代細胞中可高達85%以上;

2、轉(zhuǎn)染功能強大,不僅可高效轉(zhuǎn)染大分子質(zhì)粒DNA,還可高效轉(zhuǎn)染mRNA、siRNA、mimics和各種小分子DNA;

3、極低的細胞毒性:使用可降解生物材料,細胞毒性低,轉(zhuǎn)染細胞死亡率不到10%,大大降低了因細胞毒性對實驗結(jié)果的影響;

4、操作簡便,可用于含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞的轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染前后不需要更換培養(yǎng)液。


操作步驟:

一、質(zhì)粒DNA 轉(zhuǎn)染(以24 孔板轉(zhuǎn)染為例):

A、細胞接種:

1、 轉(zhuǎn)染前一天對細胞進行轉(zhuǎn)接,每孔接種0.8-1.2×10 5 個細胞,使轉(zhuǎn)染時細胞密度為90%左右,且生長良好(非常重要);

2、 最好在轉(zhuǎn)染開始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基,以防轉(zhuǎn)染后孵育階段細胞密度太大、營養(yǎng)不足導(dǎo)致細胞死亡。

B、PM /DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備(該步完成后應(yīng)立即進行轉(zhuǎn)染):

1、在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul無血清培養(yǎng)基,再加入適量的PM轉(zhuǎn)染試劑,見附表。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。

2、 在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul無血清培養(yǎng)基,并加入適量的溶液A,輕輕混勻,再加入適量的DNA,見附表。用移液器再次輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。

3、將DNA-培養(yǎng)基混合物滴加至PM-培養(yǎng)基混合物中,用移液器輕輕混勻后在室溫靜置15-20分鐘后,立即轉(zhuǎn)染。注意: PM-培養(yǎng)基混合物和DNA-培養(yǎng)基混合物的混合次序非常重要,切勿顛倒。

注意:離心管最好使用聚丙烯離心管。

C、轉(zhuǎn)染:

1、 將步驟B制備的轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加至培養(yǎng)基中,邊加邊輕輕晃動培養(yǎng)板以使復(fù)合物均勻分布。加完后,立即將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

2.、培養(yǎng)12小時后即可觀察,最佳觀察或收獲時間為24-48小時。

3、PM在培養(yǎng)基中仍有較高的轉(zhuǎn)染效率,因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無血清或低血清培養(yǎng)基。


二、siRNA 轉(zhuǎn)染(以24 孔板轉(zhuǎn)染為例):

A、 細胞接種:

1、轉(zhuǎn)染前一天對細胞進行轉(zhuǎn)接,使轉(zhuǎn)染時細胞密度為30-50%左右,且生長良好、無支原體污染(非常重要);

2.、最好在轉(zhuǎn)染開始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基,以防轉(zhuǎn)染后孵育階段細胞密度太大、營養(yǎng)不足導(dǎo)致細胞死亡。

B、PM /siRNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備 (該步完成后應(yīng)立即轉(zhuǎn)染):

1、 在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul無血清培養(yǎng)基,并添加適量的PM轉(zhuǎn)染試劑(見下表) 。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。

2、在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul無血清培養(yǎng)基,并添加適量的siRNA(見下表),用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。

3、將siRNA-培養(yǎng)基混合物滴加至 PM-培養(yǎng)基混合物中,用移液器輕輕混勻后在室溫靜置15-20分鐘后,立即轉(zhuǎn)染。

C、轉(zhuǎn)染:

1、將步驟B制備的轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加至培養(yǎng)基中,邊加邊輕輕晃動培養(yǎng)板。加完后,立即將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

2、37°C培養(yǎng)24-72小時,檢測基因抑制效果。如果需要,細胞培養(yǎng)4-6小時可以更換培養(yǎng)基,但不是必須。

3、 PM 在培養(yǎng)基中仍有較高的轉(zhuǎn)染效率,因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無血清或低血清培養(yǎng)基。


注意事項:

1、 剛開始轉(zhuǎn)染,請務(wù)必進行優(yōu)化實驗,如24孔板質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,每孔質(zhì)粒用量0.8 ug, PM可選擇2.0 ul、2.5 ul、3.0 ul、3.5 ul進行優(yōu)化。24孔板siRNA轉(zhuǎn)染,PM 用量2.0 ul,siRNA用量可選10 pmol、20 pmol、30 pmol、40 pmol進行優(yōu)化。

2、進行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,接種細胞的數(shù)量應(yīng)以確保轉(zhuǎn)染時的細胞匯合度在80-90%為準,過高或過低均會影響轉(zhuǎn)染效率。進行siRNA轉(zhuǎn)染,接種細胞的數(shù)量應(yīng)以確保轉(zhuǎn)染時的細胞匯合度在30-50%為準。在制備DNA或siRNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物時,應(yīng)避免體系中存在血清(推薦DMEM)。培養(yǎng)體系中盡量不要添加抗生素,抗生素會導(dǎo)致培養(yǎng)細胞死亡。

3、溶液A僅用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,RNA或siRNA轉(zhuǎn)染不需加入溶液A。

4、 請注意質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和siRNA轉(zhuǎn)染時對細胞密度和轉(zhuǎn)染試劑用量等條件的差異,不要混用同一條件。

5、 如果需要質(zhì)粒穩(wěn)轉(zhuǎn),請在轉(zhuǎn)染24-48小時后加入篩選培養(yǎng)基。

6、 本產(chǎn)品適合于質(zhì)粒DNA、siRNA分別獨立轉(zhuǎn)染,如需質(zhì)粒DNA、siRNA共轉(zhuǎn),請選用核酸共轉(zhuǎn)染試劑(abs60317)。

附表 1: 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染不同培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件

培養(yǎng)皿96 孔板48 孔板24 孔板12 孔板6 孔板10cm 皿
培養(yǎng)基、試劑、DNA量無血清培養(yǎng)基(ul)2x102x252x502x1002x2002x1000
溶液 A (ul)0.41.02.04.08.040
PM (ul)0.51.32.55.01050
1ug/ul plasmid (ul)0.160.40.81.63.216
培養(yǎng)基(ml)0.100.250.501.02.010




附表 2:siRNA 轉(zhuǎn)染不同培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件

培養(yǎng)皿96 孔板48 孔板24 孔板12 孔板6 孔板10cm 皿
培養(yǎng)基、試劑、DNA量無血清培養(yǎng)基(ul)2x102x252x502x1002x2002x1000
PM (ul)0.41.02.04.08.040
siRNA (pmol)4.010204080400
培養(yǎng)基(ml)0.100.250.51.02.010



儲存/保存方法:

-20°C 避光保存,有效期一年,使用前請輕輕混勻。


試劑盒組成:

貨號PM溶液 A 
abs60324-0.5ml0.5ml0.4ml
abs60324-1.0ml1.0ml0.8ml
abs60324-1.5ml1.5ml1.2ml


產(chǎn)品用途:

適用細胞系 :小鼠軟骨細胞,大鼠軟骨細胞,人關(guān)節(jié)軟骨細胞,人肺靜脈內(nèi)皮細胞,人臍靜脈內(nèi)皮細胞,小鼠肺成纖維細胞,人肺癌上皮細胞,人乳腺癌上皮細胞,人結(jié)腸癌細胞,人氣管上皮細胞, 人肝癌細胞,人宮頸癌上皮細胞,前列腺癌上皮細胞,大鼠肺靜脈平滑肌細胞,人肺動脈平滑肌細胞,大鼠心肌細胞,人纖維肉瘤細胞,大鼠骨骼肌細胞,人橫紋肌肉瘤細胞,人膠質(zhì)母細胞瘤細胞, 人黑色素瘤細胞,人神經(jīng)母細胞瘤細胞,小鼠肝癌細胞,小鼠胚胎成纖維細胞等等


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