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標簽蛋白純化填料解決方案

更新時間:2025-02-11      點擊次數(shù):227

一、背景介紹

 

Ni-IDA Pharose FF是含亞氨基二乙酸(iminodiacetic acid, IDA)基團的金屬螯合填料,以瓊脂糖微球為基質(zhì),通過活化偶聯(lián)亞氨基二乙酸(IDA),再螯合Ni2+。適用于大部分帶組氨酸標簽(His-tag)蛋白的親和層析。

 

Ni-NTA Sepharose FF是含次氮基三乙酸(NTA)基團的金屬螯合填料, 以瓊脂糖微球為基質(zhì),通過活化偶聯(lián)次氮基三乙酸(NTA),再螯合Ni2+。與亞氨基二乙酸(IDA)相比,具有更好的螯合劑、還原劑、堿性的耐受性。主要用于帶組氨酸標簽(His-tag)蛋白的親和層析。

 

圖1 Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF系列使用流程圖

 

圖2 Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF系列使用流程圖

 

二、標簽蛋白純化填料參數(shù)

 


類別

Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF

Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF

基質(zhì)

6%交聯(lián)瓊脂糖

配基

亞氨基二乙酸,~30μmol Ni2+/mL

次氮基三乙酸,~17μmol Ni2+/mL

粒徑范圍a

45~165μm

平均粒徑

~90μm

動態(tài)結(jié)合載量b

≥40mg/mL帶組氨酸標簽蛋白

推薦工作流速

60~300cm/h

最大流速與壓力

>1500cm/h,0.5MPa

使用 pH

4~8.5(推薦的工作pH),3~12(長期穩(wěn)定);2~14(短期穩(wěn)定)

化學穩(wěn)定性

在以下溶液中穩(wěn)定:常用的水相緩沖液、1mol/L氫氧化鈉、8mol/L尿素、6mol/L鹽酸胍、70%乙醇等




 

注:

a:90%體積以上的微球在此粒徑范圍;

b:DBC10%測試條件為:10%流穿,大腸桿菌表達帶組氨酸標簽的重組蛋白,6min停留時間。

 

三、應用數(shù)據(jù):

 

圖3 Lane M: Marker

Lane 1 :Start material

Lane 2: Flowthrough 1

Lane 3: Flowthrough 2

Lane 4: Elution (20 mM Imidazole)

Lane 5: Elution (50 mM Imidazole)

Lane 6: Elution (100 mM Imidazole)

Lane 7: Elution (200 mM Imidazole)

Lane 8: Elution (300 mM Imidazole)

Lane 9: Elution (500 mM Imidazole)

 

填料: Ni-IDA 瓊脂糖凝膠FF(重力預裝柱)(Cat: abs91007-G),1mL

樣品:his6 -tagged recombinant Streptococcus Protein G produced in E. coli

結(jié)合緩沖液:20mM PB, 150mM NaCl, pH7.4

洗脫緩沖液:20mM PB, 150mM NaCl, 20-500 mM Imidazole, pH7.4

 

圖4 填料:Ni-NTA 瓊脂糖凝膠FF(中壓預裝柱)(Cat: abs91008-M),1mL

 

樣品:his6 -tagged recombinant Streptococcus Protein G produced in E. coli

結(jié)合緩沖液:20mM PB, 150mM NaCl, pH7.4

洗脫緩沖液:20mM PB, 150mM NaCl, 20-500 mM Imidazole, pH7.4

 

表 NTA系列?屬螯合填料的耐受性


類型

Ni-NTA 瓊脂糖凝膠FF

螯合劑 1 mM EDTA

 

螯合劑 2 mM EDTA

 

螯合劑 5 mM EDTA

 

螯合劑 10 mM EDTA

 

還原劑 20 mMDTT

 

還原劑 20 mM BME

 

還原劑 5 mM TCEP

 

還原劑 20 mM TCEP

 

還原劑 10 mM GSH

 

變性劑 8 M 尿素

 

變性劑 6 M 鹽酸胍

 

去污劑 2% 曲拉通 X-100

 

去污劑 2% 吐溫 20

 

去污劑 2% 吐溫 80

 

堿 1 M 氫氧化鈉

 




 

四、愛必信標簽蛋白純化填料產(chǎn)品信息


貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

abs91007-F

Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF

10mL/100mL

abs91007-M

Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF(中壓預裝柱)

1mL/5mL

abs91007-G

Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF(重力預裝柱)

1mL/5mL

abs91008-F

Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF

10mL/100mL

abs91008-M

Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF(中壓預裝柱)

1mL/5mL

abs91008-G

Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF(重力預裝柱)

1mL/5mL




 

Absin產(chǎn)品線:

爆款產(chǎn)品:爆款試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測);細胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠,胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細胞因子)、分化試劑盒;分子(mRNA合成服務+提取試劑盒);化合物大包裝;輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...

特色產(chǎn)品:雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...

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